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（1.徐州医学院,江苏 徐州 221004；2.广西中医药大学,广西 南宁 530001）
【摘 要】目的：研究没食子酸乙酯对PC12细胞的毒性作用.方法：SRB法体外检测没食子酸乙酯对PC12细胞的毒性.结果：不同浓度的没食子酸乙酯对PC12细胞的增值均有不同程度的抑制作用,且呈剂量依赖性.结论：1.25μg/mL～5μg/mL浓度范围没食子酸乙酯对PC12细胞的毒害最小.
【关键词】没食子酸乙酯；PC12；毒性
※基金项目：本研究获得徐州医学院优博项目（编号D2014017）；江苏省麻醉重点实验室开放课题（KJS1404）；江苏省新药与临床药学重点实验室主任基金（ZR-XY201402）资助.
作者简介：黄金兰,女,医学博士,讲师,从事神经退行性疾病研究.
通讯作者：吴登攀,男,医学博士,讲师,从事新药研究开发.
在阿尔茨海默病(AD)患者脑组织中普遍存在着神经氧化损伤,AD病人脑中表现出异常高的氧化修饰蛋白、脂类和DNA水平,保护神经元免受氧化胁迫并在寻找合适的抗氧化剂,是防治AD的有效手段.没食子酸乙酯是一种用于油脂的抗氧化剂、食品添加剂及某些药品的中间体,据报道,没食子酸乙酯具有对神经细胞的氧化应激损伤具有一定保护作用,但同时在一定浓度范围内对神经细胞SH-SY5Y也有一定的毒性[1],本研究拟以没食子酸乙酯为研究对象,体外评价其对小鼠肾上腺嗜铬瘤细胞株PC12的毒性作用.
1. 材料
1.1 药物、细胞株与主要试剂
没食子酸乙酯（购自阿拉丁,E119029）；小鼠肾上腺嗜铬瘤细胞株PC12（上海细胞生物研究所细胞库）；Sulforhodamine B（Sigma,批号230162）,胚胎牛血清（FBS,Thermo,批号SV30087.02）；DMEM（Life,12800-017）.
1.2 主要仪器
CO2培养箱(Thermo,型号：3111),倒置显微镜(Olympus,型号：IX53),酶标仪(Bio Tek,型号：Elx808)
2. 方法
2.1 细胞培养
PC12细胞置37℃、5%CO2的培养箱中,用含10% FBS的高糖DMEM培养液培养.倒置显微镜观察细胞生长情况,0.25%胰蛋白酶消化传代,取对数生长期细胞用于实验.
2.2 SRB法检测没食子酸乙酯对PC12细胞的毒性
取对数生长期PC12细胞,胰酶消化,调整浓度为10000个/mL的单细胞悬液并接种于96孔培养板,100μL/孔,24h后加入含不同浓度没食子酸乙酯培养液,对照组加入等体积溶剂培养液,每组设6个复孔（重复3次）,置培养箱中培养72h,终止时弃培养液,加入100μL预冷的10%TCA固定,4℃冰箱置1h.弃固定液,清水洗3次,甩干干燥,每孔加入100μL0.4%SRB室温作用30min,用1%冰醋酸洗去游离染料.甩干干燥,每孔加入100μL10mM Tris溶解,放摇床直至染料全部溶解.最后用酶标仪在564nm波长处测定OD值.细胞抑制率%等于（1-实验组平均OD/对照组平均OD）×100%
2.3 统计学处理
采用SPSS11.5进行统计学处理.计量资料以x±s表示.组间比较采用配对t检验.
3. 结果
由表1结果显示,不同浓度的没食子酸乙酯对PC12细胞的增值均有不同程度的抑制作用,并随浓度增加,抑制率增大即细胞存活个数越少（图1）,其中1.25μg/mL～5μg/mL浓度范围对PC12细胞的毒害最小.
4. 讨论
磺基罗丹明B（sulforhodamine B,SRB）是一种蛋白质结合染料,可与生物大分于中的碱性氨基酸结合,其颜色变化与活细胞蛋白成正比.SRB法不仅具备M论文范文法操作简便、敏感的特点,而且测量结果不受时间影响,特别适用于大规模药物筛选及毒性评价.
PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株,属神经嵴源性,具神经内分泌细胞的一般特征,且具可传代特点,能够代替原代培养的神经细胞[2],广泛应用于神经生理、药理学研究.
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没食子酸乙酯作为一种抗氧化剂,神经细胞的氧化应激损伤具有一定保护作用,但其有一定细胞毒性,本研究采用SRB法进一步评价其对PC12细胞的毒性作用.结果显示不同浓度的没食子酸乙酯对PC12细胞的增值均有不同程度的抑制作用,且呈剂量依赖性,其中1.25μg/mL～5μg/mL浓度范围对PC12细胞的毒害最小.
【参考文献】
［１］田伟,毕玉婷,周启龙,等.没食子酸酯对神经细胞的抗氧化保护作用研究[J].天然产物研究与开发,2013,25:1423-1427.
［２］黄文超,李云峰,罗质璞.单胺递质对皮质酮所致的PC12细胞损伤的保护作用[J].中国药理学通报,2003,19(1):103-106.
［责任编辑：汤静］
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