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（楚雄医药高等专科学校,云南 楚雄 675005）
【摘 要】高效毛细管电泳是指以高压电场为驱动力,以毛细管作为分离通道,依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术.高效毛细管电泳一般存在六种分离模式,即毛细管区带电泳、毛细管胶束电动色谱、毛细管凝胶电泳、毛细管电色谱、毛细管等电聚焦电泳及毛细管等速电泳.通过对每种分离模式的分离特点介绍以及近年来对几种分离模式的应用情况,本文阐述了高效毛细管电泳在现代中药发展中的广阔前景.
【关键词】高效毛细管电泳；中药；应用
高效毛细管电泳(High Performance Capillary Electrophoresis, HPCE),是指以高压电场为驱动力,以毛细管作为分离通道,依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术.经典电泳法是早于20世纪30年代提出的,广泛用于医学、生物化学分离分析,但其存在分辨率较低和柱效低的缺点,而高效毛细管电泳就是经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物,具有色谱和电泳两种分离机制,不仅克服了经典色谱的缺点,兼有高压电泳的高速、高分辨率的特点,而且还具有高效液相色谱法的高效率的优点,因此,毛细管电泳法广泛用于离子型生物大分子的快速分析、DNA序列的测定、单个细胞和病毒的分析,已经成为生命科学研究、医学诊断、刑事侦查的重要手段.而近十几年来,HPCE技术才用于中药的研究,虽然还处于起步阶段,但是与常用于研究中药的高效液相色谱法相比,却也已经显现出明显的优势,有利于中药中有效成分的分析,更重要的是,对现代化的发展起着积极的推动作用.本文就近年来对高效毛细管电泳法在中药成分研究分析的应用作一简要的介绍.
1. 高效毛细管电泳简介
1.1 原理
HPCE是在电场作用下离子的大小、电荷数量与符号及双电层电位高低的不同,而导致的迁移速率不同的电泳分离行为.是区别于液相色谱法基于组分在流动相和固定相之间的分配系数的不同而导致选择性与保留时间不同的色谱行为.
1.2 特点
HPCE具有分离效率高、速度快、灵敏度高,所需样品少、溶剂消耗少、分析成本低且毛细管柱的论文范文远低于高效液相色谱柱,此外,它还具有抗污染能力强、分离模式多等特点,特别适合于中药中多种样品中各类化学成分的分析.
1.3 分离模式
在结合传统电泳的工作方式与色谱技术的特点之后,HPCE一般存在以下六种[1-3]分离模式：毛细管区带电泳(Capillary Zone Electrophoresis,CZE)、毛细管胶束电动色谱(Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography,MECC)、毛细管凝胶电泳(Capillary Gel Electrophoresis,CGE)、毛细管电色谱(Capillary Electrochromatography,CEC)、毛细管等电聚焦电泳(Capillary Isoelectric Focusing,CLEF)及毛细管等速电泳(Capillary Isotachophoresis,CITP) .
2. 毛细管电泳法不同模式在中药中的应用
2.1 生物碱类成分
生物碱类成分能解离带上正电荷,一般用CZE模式分析,在一定的pH值下实行分离.有时加入有机溶剂如乙腈、甲醇作为修饰剂改善电渗流和选择性.
朱萱萱等[4]采用CZE法测定麻黄中6种生物碱：论文范文、伪论文范文、去甲论文范文、去论文范文论文范文、伪麻黄论文范文、论文范文伪论文范文,对不同产地的麻黄首次进行分离定量测定.
陈康等[5]通过在0.1mol/L硼酸溶液：0.2mol/L氢氧化钾溶液等于4：1,pH等于8.90的缓冲液条件下,以电压10kV、实验温度25℃、测定波长192nm,对l0个不同产地麻黄样品中论文范文和伪论文范文进行定量分析.结果表明,论文范文和伪论文范文为基线分离,平均回收率分别为96.55% (RSD等于2.2%),96.69%(RSD等于2.9%).从而得出结论,通过CZE所建立的定量分析方法,简便、快速、灵敏,为麻黄及其制品质量监控提供参考.
2.2 蒽醌类成分
王德先等[6]用CZE对中药芦荟中的有效成分芦荟苷和芦荟大黄素进行含量测定.采用24 mmol/L的磷酸盐(pH10.85)作为缓冲溶液在电压为15kV和检测波长为254nm的条件下进行分离实验,结果可知,芦荟提取液中有效成分获得基线分离.其定量分析表明,芦荟苷的质量浓度为0.029g/L～1.00g/L时,其峰面积与质量浓度呈线性关系(r等于0.997)；芦荟大黄素的质量浓度为5.4mg/L～84mg/L时,其峰面积与质量浓度呈线性关系(r等于0.999).从而得出结论,利用毛细管法测定芦荟中有效成分的质量分数与薄层法和高效液相色谱法测定的结果基本在同一水平,但毛细管电泳法操作更简便、实验消耗更低.
2.3 多糖类成分
赵燕等[7]以1-论文范文-3-论文范文-5-吡唑啉酮(PMP)为单糖的衍生化试剂,建立毛细管区带电泳(CZE)同时分离分析8种常见还原单糖PMP衍生物的方法.将该方法用于中药大黄多糖(RTP)的单糖组成及其摩尔比率的测定.结果表明,在pH 10.8和150 mmol/L硼砂缓冲溶液、l0kV分离电压、25℃柱温的优化条件下,8种单糖衍生物实现了良好的分离,并证实RTP由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸5种单糖组成；样品测定回收率为96．4％～105．3％.该方法灵敏、快速、准确,可用于中药RTP的组成分析.
2.4 有机酸类成分
范国荣等[8]选择CZE分离模式,以肉桂酸为内标物,在毛细管40cm*50μm,运行缓冲液 pH等于9.50的磷酸二氢钠-硼砂(50mmol/L：12.5mmol/L,内含16mmol/L β-CD),压力进样20psi*s,并在操作电压18kV和柱上在线检测UV 200nm,柱温25℃的条件下,分离测定四倍体板蓝根药材中抗内毒素活性成分5种有机酸成分的含量,并与二倍体板蓝根相比较,以考察四倍体板蓝根药材的优良品质量.
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邢凤琴等[9]采用二扭管阵列检测器,在209nm、254nm、308nm波长处对不同品种、不同产地的共30个党参样品中的4种有机酸类活性成分成分（丁香醛、丁香酸、烟酸和香草酸 ）进行分离与测定.在石英毛细管柱(50μmI.D×45cm),缓冲溶液为20％乙腈、25mmol／L硼砂溶液(pH等于9.12),分离电压为18 kV,温度28℃的条件下,样品和标准品在20min内得到基线分离.实验表明,CZE法简单、快捷、灵敏,当严格控制实验过程中的每个环节时．可以得到良好的准确性和重现性,故可作为中药党参的质量控制方法.
2.5 黄酮类成分
黄酮类化合物可以利用黄酮类化合物含有的邻羟基,与硼砂复合成带电粒子,再用CZE模式分离 ,但由于黄酮类化合物一般不带电,多用MECC模式分离测定.
孙沂等[10]采用熔融石英毛细管柱 (66.5cm×50μm ID ,有效长度 58 cm)作为分离通道；以50mmol／L硼砂其中含18%甲醇的溶液(pH9.7)为运行缓冲液；在24kV的运行电压、20℃的毛细管柱温、210nm检测波长的条件下,以利福平为内标测定了红花中腺苷、芦丁和槲皮素的含量.结果表明,腺苷、芦丁和槲皮素分别在10～160mg/L,100～2000mg/L和100～1600mg/L线性关系良好(r>,0.998)；平均回收率分别为98.5%～100.5%,96.9%～99.5%和99.1%～99.5%；RSD分别为6.5%,5.2%和5.6%(n等于5).由此可知,此法MECC法操作简便快速,回收率及重现性好,可作为红花质量控制的方法.
2.6 蒽醌类成分
郑文捷等[11]用MECC分离测定决明子及决明子茶中大黄素、芦荟大黄素含量.在以缓冲体系为15.0mmol/L硼砂-30.0mmol/L SDS-10.0%乙醇(pH9.60),熔融石英毛细管柱(50cm*75μm),分离电压为20kV,检测波长为254nm,温度为(25±0.3)℃,进样时间为5s为条件下,大黄素、芦荟大黄素在4～120g/ml、10～200g/ml范围内与峰面积线性关系良好,大黄素和芦荟大黄素平均回收率分别为98.6%和102.9%.从而得出,该方法简单、快速、准确、重现性好,可用于决明子药材及决明子茶的质量控制.
张艳等[12]采用MECC法测定瞿黄液中大黄素、大黄酚、大黄酸和大黄素甲醚的含量.以对氨基苯磺酸为内标,缓冲液为0.05mol／L的SDS、0.1mol／L三羟甲氧氨基甲烷(Tris)、0.03mol／L磷酸氢二钠,pH为8.2,温度为25℃,恒定电压25kV,检测波长254nm.结果表明,该方法的精密度、线性关系和回收率均较好,可用于瞿黄液的质量控制.
2.7 皂苷类成分
邢旺兴等[13]使用MECC分析测定了中药通光藤中通光藤苷J的含量,结果表明,在15min内即可实现对通光藤苷J的分离和测定,在43.43～1732.06μg/ml范围内线性关系良好(r等于0.9985,n等于6)；加样回收率平均为102.4％；日内RSD≤2.50％和日间RSD≤5.16％；不同产地、不同化学部位、和不同制剂中通光藤苷J的含量均有显著不同.
岩上等[14]在以25%乙睛和75mmol/L胆酸钠pH7为缓冲溶液,毛细管柱50μm×102cm,电压30kV,紫外检测波长200nm,柱温25℃为条件下,采用MECC分离人参中的人参皂苷Rbl、Rgl、Re等7种皂苷.
2.8 有机酸类成分
李蓓等[15]采用MECC分离模式,石英毛细管柱75gm×57cm,缓冲液为20mmol/L Na2B407-4mmol/L NaH2PO4-60mmol/L SDS,用6mol/L NaOH调pH至11.2,运行电压20kV,分离时间22min,温度2l℃,检测波长210nm,以水杨酸为内标物测定了苏合香和枫香脂中总桂皮酸的含量.
3. 总结和展望
HPCE是20世纪80年论文范文展起来的新技术,在中药分析领域中充分展示了其论文范文性,有广阔的应用前景.高效毛细管电泳以其高效、快速、简便且柱不易受污染的特点而优于HPLC法,在中药有效成分的分离、定性定量、中药材鉴别等方面应用越来越广泛,但目前仍存在重现性较差、线性范围窄和灵敏度较低等缺陷.近年来,有关毛细管电泳的研究日益深入,在检测器、联用技术等方面不断地得到改进或取得突破,相信HPCE技术必将在药物分析领域得到更广泛的应用.
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毛细管电泳仪引用文献:
[1] 毛细管电泳和检出限大学毕业论文范文 毛细管电泳和检出限类有关专升本毕业论文范文2500字
[2] 毛细管电泳和核酸适配体大学毕业论文范文 毛细管电泳和核酸适配体毕业论文模板范文10000字
[3] 汽车产业和电泳学士学位论文范文 关于汽车产业和电泳类本科毕业论文范文2万字
