有关成纤维细胞活化蛋白在口腔鳞状细胞癌组织中的表达毕业论文写作资料-论文写作网

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【摘要】本文以各期癌变口腔黏膜为对象,正常和癌前病变口腔黏膜为对照,进行FAP免疫组化染色,并取口腔癌旁组织进行冰冻切片.结果表明,正常和癌前期病变口腔黏膜中,成纤维激活蛋白在的间质成纤维细胞中表达阴性,在口腔鳞状细胞癌间质成纤维细胞中阳性表达,证实了在口腔鳞状细胞癌组织中有FAP的表达且FAP染色分值与OSCC不同病理分级存在正相关关系.

【关键词】口腔鳞状细胞癌癌相关成纤维细胞成纤维激活蛋白

【中图分类号】R 7 3 9 . 8 5 , R 7 3 0 . 2 【文献标识码】A 【文章编号】1674-0742(2012)04(c)-0168-02

【Abstract】To investigate the expression of FAP in fibroblast of oral carcinoma stroma,cases of OSCC,cases of OLP／OLK and casesof normal oral mocosa were detected for the expression of in the stroma by method.The results show that the expression of FAP inOSCC was positive,but in OLP／OLK and in normal oral mocosa it was not detected.There was strong positive correlation betweenthe pathological classification and the number of fibroblasts that expressed FAP.

【Key Words】Oral squamous cell carcinoma,Interface stromal fibroblasts,Fibroblast activation protein

口腔黏膜鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤, 起源于上皮细胞, 口腔癌间质中癌相关成纤维细胞(Carcinoma－associated fibroblasts,C A F s ) 体外增殖、粘附、迁移能力均高于正常间质成纤维细胞.成纤维细胞激活蛋白(Fibroblast activation protein,FAP)是新发现的一种在活化的成纤维细胞上特异性表达的分子, 其二聚体具有二肽肽酶(Dipeptidyl peptidase,DPP)和胶原酶活性.如果明确在肿瘤中成纤维细胞的表达模式, 将有益于肿瘤临床诊断与治疗.

1.材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本制备 2010年至2011年间,在重庆医科大学附属口腔医院收集正常口腔黏膜、口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)、口腔白斑(oral leukoplakia,OLK)及OSCC组织标本共58例.本试验分为OSCC组和对照组.前者有标本42例,根据病理分级标准,包括O SC CⅠ级1 6例、O S C CⅡ级1 4 例、O SC CⅢ级1 2 例,选取正常口腔粘膜及口腔癌前病变( O LP 4例、O LK 4例)各8例.

1.1.2 试剂鼠抗人FAP单克隆抗体(Santa公司),免疫组化染色试剂盒(迈新公司),显色剂DAB(迈新公司),其他试剂均为国产分析纯试剂.

1.2 方法

1. 2.1 标本制备所有组织均为新鲜标本,分切为2块,一块用液氮速冻,于-7 0℃冰箱保存备用,另一块经10 %中性论文范文液固定后常规石蜡包埋, 5μm切片, H E染色,用于病理诊断.1. 2.2 冰冻切片经-7 0℃保存的新鲜组织块在冰冻切片机上行4μm连续切片,4%多聚甲醛固定30min,-20℃冰箱保存,用于免疫组织化学染色.

1.2.3 免疫组化染色(S P法) 冰冻切片恢复至室温后,用3%过氧化氢孵育25min,消除内源性过氧化物酶的活性.正常山羊血清(PBS稀释)封闭,3 7℃孵育20m in.滴加适当比例稀释的一抗(工作浓度FAP1:50,每切片滴加50μL),加适当比例稀释的生物素标记二抗,加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素, 37℃分别孵育60、60、10min,显色剂显色,苏木素复染,封片.以表达FAP的乳腺癌标本为阳性对照,以正常乳腺组织作为阴性对照,以PBS代替一抗作为空白对照.

1.2. 4 结果判定将染色切片上出现棕论文范文颗粒的细胞判定为F A P ( + ).

分值法判定FAP染色结果:每张切片在显微镜(×200)下选择5个典型视野,每个视野内随机计数1 00个成纤维细胞,计算F A P(+)细胞百分比(%),阳性细胞数>,5%为阳性,<,5%为阴性.每张片计数5个视野的平均值.所有结果由两位病理医师独立评定.

1.2. 5 统计数据分析 FA P染色阳性标本百分率比较采用卡方检验.

2.实验结果

2.1 免疫组化染色结果

正常口腔黏膜及癌前病变粘膜中未见F A P染色阳性细胞(照片1 ).OS CC组中可观察到F AP阳性成纤维细胞.其中, OS CCⅠ级:F AP染色阳性细胞多位于紧邻癌上皮的间质中(照片3 ).O SC CⅡ级和Ⅲ级:在紧邻癌上皮的间质中,F AP染色阳性细胞分布较少,而在癌旁组织的间质中分布较多(照片4、5).

照片1 : FA P在正常组织中无表达,照片2 : F A P在重度异常增生O L K中的零星表达,照片3 : F A P在O S C CⅠ级中的表达,位于紧邻癌上皮下的间质,照片4 : FA P在O SC CⅡ级中的表达,位于癌巢周围,照片5 : F A P在O S C CⅢ级中的表达.

2.2 FAP染色阳性率比较

FAP的表达与OSC C不同病理分级即口腔癌的分化程度有关.口腔鳞癌组F AP阳性标本百分率高于对照组,结果,见表1(P <,0 .0 1).在不同病理分级的O S C C 之间, 随细胞分化程度逐渐降低,FAP阳性标本百分率有升高趋势,结果,见表2(P <,0 .05 ).

3.讨论

肿瘤的发生发展依赖于肿瘤—宿主界面微环境的平衡状态.成纤维细胞在肿瘤发生、发展过程中常有一些物质表达异常,影响肿瘤细胞的生物学行为.F AP可选择性地表达于9 0%以上的上皮癌间质,并不见于癌细胞、正常成纤维细胞或其他正常组织,本实验结果还显示F A P 在O S C C 的阳性表达与O S C C 病理分级成正相关关系,因此,可作为OS CC的辅助诊断和严重程度判定指标之一,同时为今后的研究奠定了基础.