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目录

1. 第一篇机械生论文范文参考：MiR-21,miR-145在机械牵张力调节血管平滑肌细胞生物学功能中的作用及分子机制
2. 第二篇机械生论文样文：韩中日纤维机械产业发展路径与战略研究
3. 第三篇机械生论文范文模板：振动训练对大鼠骨骼肌运动能力的影响及其机制探讨
4. 第四篇机械生论文范例：混合垃圾机械生物预处理燃烧和填埋特性研究
5. 第五篇机械生论文范文格式：海气通量的涡相关计算和参数化方法研究

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第一篇机械生论文范文参考：MiR-21,miR-145在机械牵张力调节血管平滑肌细胞生物学功能中的作用及分子机制

研究背景

血管长期暴露于搏动性血流的作用下,后者产生的机械生物力对于正常的血管结构和功能的维持具有关键作用.血管中的搏动性血流主要产生两种形式的机械生物力,分别是平行于血管长轴的剪切力(shear stress)和垂直于血管长轴的机械牵张力(stretch stress).内皮细胞衬于血管最里面,直接与血流接触,因此剪切力主要作用于血管内皮细胞.而牵张力主要是由于心脏周期性搏动引起的血管扩张产生的,因此作用于血管各层细胞,但血管平滑肌细胞(V*Cs)是其主要的靶细胞.

大量的体内外研究证实,机械牵张力调节血管平滑肌细胞的增殖、凋亡、迁移以及表型等生物学功能.一般认为,在正常情况下牵张力(9%～12%elongation)抑制平滑肌细胞的增殖、凋亡等功能,对于维持血管平衡具有重要调节作用,而在高血压、动脉粥样硬化等病理情况下,异常增高的牵张力(>,15%elongation)则促进平滑肌细胞的增殖、迁移、凋亡等功能,诱导正常的血管结构改变和功能失调.近年来国内外学者对机械牵张力调控平滑肌细胞生物学功能的分子机制做了深入研究,认为细胞表面具有力学信号感受作用的各种分子可以将胞外的机械信号转化为胞内的化学信号,通过激活一系列的信号通路和转录因子,调节各种基因的表达,从而诱导细胞生物学功能改变.但是目前对这一机械信号转导过程中的诸多机制尚不清楚,比如细胞表面是否存在特异性的力学信号感受分子,细胞内各信号分子之间的相互作用模式,以及在转录水平之外的基因表达调节机制等.进一步深入了解牵张力调节细胞功能的分子机制,对于寻找新的高血压、冠心病等心血管疾病干预靶点具有重要的意义.

microRNAs(miRNAs)是一类内源性的非编码小RNA分子,通过抑制靶基因的翻译或促进nRNA的降解在转录后水平负调控基因表达.研究证实,miRNAs在心血管系统的正常发育以及多种病理过程中发挥重要的调节作用.最近的研究发现,miRNAs也参与机械生物力调节血管细胞的生物学效应,与静止培养相比,剪切力诱导多个内皮细胞niRNAs表达改变,其中miR-19a与niR-23b在剪切力调控细胞周期中发挥关键作用,miR-92a介导剪切力对内皮细胞NO的水平的调控.但是关于牵张力对血管细胞miRNAs表达的影响,以及后者在牵张力介导的细胞生物学功能中的作用目前还不清楚.miR-21是近年广泛研究的一种miRNA,其在多种实体肿瘤细胞中表达升高,具有显著的促进细胞增殖、抑制细胞凋亡作用.此外,miR-21在血管细胞中也有丰富表达,并且在损伤血管中表达上调,促进新生内膜的形成.新近的研究发现,miR-21在内皮细胞中的表达受到剪切力的调节,并且不同形式的剪切力对miR-21表达的影响是不同的,miR-21分别在剪切力介导的内皮炎症、NO生成中发挥重要调控作用.miR-21在血管平滑肌细胞中的表达丰度明显高于内皮细胞中,鉴于miR-21在细胞增殖、凋亡调节中的作用以及机械牵张力对平滑肌细胞生物学功能的影响,我们推测牵张力可能通过调节miR-21在血管平滑肌细胞中的水平影响细胞功能.目前对miRNAs的研究多集中在其生物学效应方面,而对miRNAs本身的表达调控机制知之甚少,miR-21基因位于蛋白编码基因之间,具有独立的启动子区域,研究发现AP-1,NF-κB等转录因子可能参与miR-21表达调控,但是在牵张力的作用下,参与调节miR-21表达的转录因子尚不明确.深入了解miRNAs的表达调控机制有利于系统的认识牵张力调节血管平滑肌细胞功能的分子机制,因此,在本研究中我们也初步探讨牵张力调节miR-21表达的上游分子机制.

研究目的

1.在体外细胞水平,明确牵张力对血管平滑肌细胞miR-21表达的影响.

2.明确miR-21在牵张力介导的血管平滑肌细胞增殖与凋亡中的作用.

3.明确牵张力调节血管平滑肌细胞miR-21表达的分子机制.

研究方法1.入主动脉平滑肌细胞(HA*Cs)培养

HA*Cs细胞株购自美国ScienCell公司,细胞生长至完全融合后,吸去培养基,用PBS冲洗细胞一遍以去除残留的血清,然后加入适量预热的0.25%胰蛋白酶,在显微镜下观察到细胞细胞变圆后,吸去胰酶,加入新的平滑肌细胞完全培养基吹打均匀,转入新的细胞培养瓶放入含5%CO2的37℃细胞培养箱中继续培养.

2.机械牵张力干预体外培养的HA*Cs

接种HA*Cs至铺有Ⅰ型鼠尾胶原的Flexcell6孔板中(105细胞/孔),待细胞生长至80%～90%融合时,利用无血清培养基诱导培养24小时后,更换新的完全培养基或无血清培养基,使用Flexcell-5000细胞牵张力仪给予HA*Cs不同强度的牵张力刺激,分组如下：

(1)10%牵张力组：分别给予最大牵拉强度为10%,频率为1Hz的周期性牵张力分别刺激细胞0、3、6、12、24小时.

(2)16%牵张力组：分别给予最大牵拉强度为16%,频率为1Hz的周期性牵张力分别刺激细胞0、3、6、12、24小时.

3.实时荧光定量PCR检测miR-21表达水平

使用Invitrogen公司的Trizol提取包含miRNAs的HA*Cs总RNA,利用丹麦Exiqon公司的miRNAs cDNA合成试剂盒和miRNAs SYRB Green Master Mix试剂盒分别进行逆转录和实时荧光定量PCR反应,小RNA U6作为各样本miR-21表达水平的内参照,每组样本重复检测4次.U6及miR-21PCR引物均购自Exiqon公司.

4.细胞转染

利用Invitrogen公司的Lipofectamine2000分别转染不同浓度的miR-21inhibitor和mimics,调节HA*Cs miR-21的表达水平,化学修饰的miR-21inhibitor和mimics均由上海吉玛公司合成,转染PDCD4表达质粒上调HA*Cs PDCD4蛋白水平.转染细胞48小时后,给予细胞牵张力刺激,观察相应的细胞功能或目的蛋白水平变化.

5.HA*Cs增殖检测

牵张力干预体外培养的HA*Cs12小时,利用美国罗氏公司的BrdU细胞增殖检测试剂盒或细胞计数仪检测牵张力对HA*Cs增殖的影响；转染miR-21inhibitor或nimics48小时后,再给予牵张力干预12小时后,BrdU掺入法和细胞计数法检测HA*Cs增殖水平,明确miR-21在牵张力介导的HA*Cs增殖中的作用.

6. Western blot

牵张力刺激HA*Cs结束后,提取胞浆蛋白,测定蛋白浓度后加蛋白上样缓冲液煮沸5分钟.取15～20ug蛋白进行SDS-PAGE电泳,利用Western blot分别检测p27,p-Rb,以及PDCD4蛋白表达.每个样本重复检测4次,(3-actin作为内参.

7.细胞凋亡检测

利用BIPEC公司的Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit检测HA*Cs凋亡情况.牵张力干预结束后,用胰酶消化的方法收集细胞,每个样本用400ul binding buffer重悬,经过15分钟的Annexin V-FITC标记,5分钟PI标记后,在1小时内进行细胞流式分析,每个样本在流式分析中计数10000个细胞.

8.实时荧光定量PCR测定pri-miR-21、pre-miR-21、PDCD4mRNA水平牵张力刺激HA*Cs结束后,利用Trizol提取细胞总RNA.使用日本TaKaRa公司的cDNA合成试剂盒将样本总RNA逆转录为cDNA,然后利用TaKaRa公司的SYBR Green实时定量PCR试剂盒进行PCR反应.PCR引物由上海吉玛公司合成.PCR反应结束后得到Ct值,并计算2-△△Ct,β-actin作为pri-miR-21、pre-miR-21、 PDCD4mRNA表达水平的内参.

9.细胞免疫荧光

16%牵张力刺激体外培养的HA*Cs3小时后,利用免疫荧光方法观察c-fos、 c-jun的表达变化.牵张力刺激细胞结束后,免疫染色固定液固定30分钟,PBS冲洗后力()0.1%TritonX-100室温下孵育8分钟,继之用5%BSA封闭30分钟,经PBS冲洗后4℃条件下分别孵育c-fos, c-jun抗体(Cell Signaling Technology,1:200)过夜,次日,经过荧光二抗孵育1小时,DAPI染核后,在激光共聚焦显微镜下,观察目的蛋白的表达水平.

10.凝胶迁移实验(EMSA)

利用EMSA方法检测16%牵张力对转录因子AP-1与NF-κB活性的影响.牵张力干预平滑肌细胞结束后,利用Pierce细胞核蛋白提取试剂盒收集细胞核蛋白,并利用BCA方法检测核蛋白的浓度.使用T4连接酶在AP-1与NF-κB双链核苷酸探针末端标记[γ-32P]ATP,取8ug核蛋白与标记的转录因子探针及试剂盒其它成分共计20ul预混后,冰上孵育30分钟,然后用4%非变性胶进行电泳,根据Pierce EMSA试剂盒说明书操作具体步骤.

11.统计学分析

所有数据以均数±,标准误表示,使用SPSS13.0统计学软件进行数据分析,两组之间的比较采用非配对t检验,多组之间的比较采单因素方差分析,p＜0.05认为有统计学意义.

结果

1.机械牵张力对体外培养的人主动脉平滑肌细胞(HA*Cs) miR-21表达水平的影响

研究结果显示,在无血清条件下,与静止培养的细胞相比,16%牵张力自6小时开始显著上调体外培养的HA*Cs miR-21的表达水平,上调趋势保持到24小时,表达高峰在12小时(p＜0.01)；而10%牵张力对HA*Cs miR-21的表达水平没有显著影响(p＞0.05).在有血清刺激的条件下,16%牵张力仍然持续上调miR-21的表达(p＜0.01),但上调幅度没有无血清条件下明显；而10%牵张力明显抑制miR-21的表达,与静止对照相比,miR-21的表达6小时开始显著下调(p＜0.05),12小时下调最明显.

2.miR-21在机械牵张力调控人主动脉平滑肌细胞增殖中的作用

利用BrdU掺入法与细胞计数的方法检测miR-21在牵张力调节的HA*Cs增殖中的作用.实验结果显示,与静止培养的细胞相比16%牵张力显著增强HA*Cs的增殖水平；转染miR-21抑制物(inhibitor)抑制miR-21的水平,结果与miRNA阴性对照inhibitor相比,miR-21的表达水平下调42倍(p＜0.01),而转染miR-21inhibitor的HA*Cs增殖水平显著下降(p＜0.01).同样的实验条件下,利用胰酶消化的方法收集细胞后进行细胞计数,结果显示与BrdU掺入法一致(p＜0.05).由于在含血清条件下,10%牵张力抑制miR-21的表达,转染化学修饰的miR-21类似物(mimics)上调miR-21的表达水平,结果显示miR-21mimics升高miR-21的表达70倍(p＜0.01)；而BrdU掺入法结果显示,与静止培养的HA*Cs相比,10%牵张力显著抑制细胞的增殖水平(p＜0.01),而转染miR-21mimics显著降低10%牵张力对HA*Cs增殖的抑制作用(p＜0.05).

Western blot结果显示16%牵张力抑制细胞周期抑制因子p27的表达,促进p-Rb的表达(p＜0.01)；而与转染miRNA阴性对照inhibitor相比,miR-21inhibitor部分逆转16%牵张力对p27,p-Rb表达的影响(p<,0.01).

3.miR-21在机械牵张力介导的人主动脉平滑肌细胞凋亡中的作用

利用Annexin-FITC与PI双染细胞凋亡试剂盒检测牵张力对细胞凋亡的影响,结果显示：与静止对照组比较,16%牵张力增加体外培养的HA*Cs凋亡水平(9.19±,0.66vs1.30±,0.12,p＜0.01)；转染miR-21inhibitor抑制miR-21的水平,结果显示与阴性对照miRNA inhibitor相比较,miR-21inhibitor显著增强了16%牵张力对HA*Cs的促凋亡作用(25.5±,1.61vs9.38±,1.57,p＜0.01)；在静止培养的HA*Cs中,转染miR-21inhibitor对细胞凋亡没有显著的影响.在有血清条件下,对静止对照组相比较,10%牵张力对HA*Cs的凋亡没有显著影响(p＞0.05).

4.PDCD4在16%牵张力介导的人主动脉平滑肌细胞凋亡中的作用

利用T*ARA cDNA合成与SYBR Green PCR定量试剂盒检测16%牵张力对HA*Cs PDCD mRNA水平的影响,结果显示：与静止对照组相比,16%牵张力增加PDCD的mRNA水平1.98倍(p＜05),而Western blot结果显示,16%牵张力显著抑制PDCD的蛋白水平0.55倍(p＜0.05).转染miR-21inhibitor后,16%牵张力对HA*Cs PDCD4蛋白水平的抑制作用明显减轻(p＜0.05).为明确PDCD4在牵张力诱导的HA*Cs凋亡中的作用,转染PDCD4表达质粒上调其蛋白表达水平,再给予16%牵张力刺激,细胞流式结果显示,转染PDCD4表达质粒明显促进16%牵张力的诱导细胞凋亡作用(p＜0.01).

5.16%牵张力对人主动脉平滑肌细胞AP-1、NF-κB活性的影响

利用实时荧光定量PCR的方法检测16%牵张力对HA*Cs miR-21转录初级产物pri-miR-21,前体pre-miR-21水平的影响,结果显示对静止对照相比,16%牵张力分别增加pri-miR-21水平1.73倍(p＜0.05),pre-miR-21水平2.85倍(p＜0.01).AP-1、NF-κB是介导机械牵张力调控平滑肌细胞生物学功能的重要转录因子,在特定条件下也参与miR-21的表达调控.

Western blot结果显示,16%牵张力明显增加NF-κB p65的磷酸化水平,高峰在牵张力干预后1、3小时,至6小时恢复至静止对照水平,而16%牵张力对NF-κBp65的蛋白水平没有显著影响；16%牵张力持续引起c-jun勺表达水平和磷酸化水平显著增高,但对c-fos蛋白的表达水平及磷酸化水平没有明显影响.细胞免疫荧光结果显示,16%牵张力增加c-jun在细胞核中的表达,而增加c-fos在胞浆中的表达,c-fos在胞核中的表达没有显著变化.EMSA结果显示,16%牵张力显著增加HA*Cs AP-1与NF-κB的活性(p＜0.05).

6.AP-1、NF-κB在16%牵张力诱导HA*Cs miR-21表达中的作用

利用Lipo2000转染c-jun siRNA下调HA*Cs c-jun的表达,16%牵张力干预HA*Cs前1小时,加入NF-κB抑制剂SN50抑制其活性(p＜0.01).结果显示,c-jun siRNA明显抑制HA*Cs中c-jun的表达,16%牵张力诱导的AP-1活性显著下降(p＜0.01).实时荧光定量PCR结果显示,c-jun siRNA抑制16%牵张力诱导的miR-21表达(p＜0.01),而SN50对16%牵张力诱导的miR-21表达没有明显作用(p＞0.05).

结论

1.16%机械牵张力上调人主动脉平滑肌细胞miR-21的表达,而在有血清条件下,10%牵张力抑制miR-21的表达水平.

2.miR-21参与介导机械牵张力调节人主动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的作用.

3.机械牵张力通过增强转录因子AP-1(c-jun)的活性上调人主动脉平滑肌细胞miR-21表达.

研究背景

血管平滑肌细胞(V*Cs)具有较强的可塑性,具有收缩和分泌功能.在正常生理状态下,V*Cs处于静息状态,表达一系列分化成熟的血管平滑肌细胞特有的收缩蛋白分子,呈收缩表型,而当血管受到病理性刺激时,分化成熟的V*Cs增殖、迁移能力增强,并分泌多种细胞因子与细胞外基质,不表达或低表达收缩表型V*Cs所特有的蛋白分子,由收缩表型变为分泌表型,这一过程称为V*Cs表型转换.V*Cs表型转换在高血压、冠心病等增殖性血管疾病病理机制中发挥重要作用,然而目前对V*Cs表型转换的分子机制还不十分清楚.

microRNAs (miRNAs)是一类内源性非编码小RNA分子,通过与其靶基因mRNAs3',非编码端结合,抑制翻译或促进靶基因mRNA降解,在转录后水平调节基因表达.新近的多项研究证实,血管平滑肌细胞中含有丰富的niRNAs表达,在平滑肌细胞生物学功能调节中发挥重要作用,其中miR-145/143、miR-21、 miR-26a等miRNAs分子被证实与血管平滑肌细胞表型转换密切相关.由于上述结果主要来源于动物实验,并且miRNAs分子的表达及生物学作用具有一定的组织特异性,miRNAs在人大动脉血管平滑肌细胞表型转换中的作用还不十分清楚.

血管一直暴露于搏动性血流的冲击下,由血流产生的机械生物力学在维持血管的正常形态与功能,以及病理性血管重构中发挥重要调节作用.位于血管中层的平滑肌细胞主要受牵张力的影响,后者通过作用于V*Cs表面的力学信号感受分子,引起细胞骨架蛋白的重构,引起细胞形态以及增殖、凋亡、迁移、表型转换等生物学功能的改变.最近的研究发现,miRNAs也参与调节机械生物力学介导的细胞生物学作用.在剪切力的作用下,体外培养的血管内皮细胞miRNA表达谱发生显著变化,表达差异的多个niRNAs分子在内皮细胞周期、凋亡以及炎症反应中发挥重要调节作用；机械牵张力通过上调miR-26a表达,诱导人气道平滑肌细胞肥大.基于机械牵张力以及niRNAs在调节血管平滑肌细胞生物学功能中的作用研究,我们推测牵张力可能通过调节miRNAs的表达影响V*Cs表型转换.在本研究中,我们首先利用miRNA芯片对比分析了牵张力干预的人主动脉平滑肌细胞(HA*Cs)与静止培养的HA*Cs miRNA表达谱,发现miR-21、miR-145、miR-221等几个与V*Cs表型转换密切相关的miRNA分子表达发生改变,高度提示miRNAs可能是牵张力介导的平滑肌细胞表型转换中的重要调节因子,因此我们进一步分析了上述miRNA分子在牵张力介导的细胞表型转换中的作用.

随着对miRNAs生物学功能的研究深入,目前认识到miRNAs作为复杂的基因表达调控网络中的一个环节,其本身的表达调控亦受到各种刺激因素精细的调节.机械牵张力能够激活平滑肌细胞中的多条信号转导通路和转录因子,影响细胞增殖、分化等密切相关的一系列基因的表达.在人类基因组中,有约一半的miRNA基因具有独立的启动子区域,受到各种转录因子及信号通路的影响,那么参与介导牵张力调控平滑肌细胞表型转换的miRNA分子的表达是如何调节的这一问题也将是本研究的重点.

研究目的

(1)明确机械牵张力对人主动脉平滑肌细胞miRNAs表达谱的影响.

(2)明确miR-145在牵张力诱导的平滑肌细胞表型转化中的作用.

(3)探讨牵张力调节人主动脉平滑肌细胞miR-145表达的分子机制.

研究方法

1.血管平滑肌细胞培养及牵张力干预

人主动脉平滑肌细胞(HA*Cs)及平滑肌细胞培养基均购自美国ScienCell公司,4-7代平滑肌细胞用于实验.按105细胞／孔密度接种平滑肌细胞至铺有Ⅰ型鼠尾胶原的Flexcell6孔板中,细胞生长融合至80%-90%时,更换无血清培养基诱导培养24小时,然后重新更换新的无血清培养基,利用电脑控制的Flexcell-5000Tension装置给予体外培养平滑肌细胞牵张力刺激(16%elongation,1Hz).药理学信号通路抑制剂在牵张力刺激细胞1小时前,加入细胞培养基中.

2.miRNA芯片检测

体外培养的HA*Cs经16%牵张力刺激12小时后,与静止对照组一起,收集细胞TRIzol法抽提含miRNAs的总RNA,利用芯片技术筛查表达差异的miRNAs分子.总RNA的质检、荧光探针的标记、芯片杂交以及数据分析,由上海康成生物公司完成,使用的芯片为Exiqon公司miRNA表达谱芯片,牵张力组与对照组各送检3个样本.

3.实时荧光定量PCR验证miRNA芯片筛查的miRNAs分子

干预细胞结束后TRIzol法提取总RNA,检测RNA浓度及A260/280比值后,利用Exiqon公司的通用型miRNA cDNA合成试剂盒进行逆转录反应,然后利用Exiqon公司的niRNA引物及SYBR Green PCR定量试剂盒进行PCR反应,反应结束后得到Ct值,计算2-△△Ct,U6作为引物,具体步骤及反应条件根据试剂盒说明书操作.

4.Western blot测*C收缩表型分子的蛋白表达水平

细胞干预结束后,裂解细胞分别抽提胞浆、胞核蛋白,BCA法检测蛋白浓度.蛋白样品加入适量loading buffer,煮沸冷却后进行SDS-PAGE电泳,依次转膜、5%奶粉封闭,一抗过夜孵育、1×,TBST洗膜、二抗孵育1小时、1×,TBST洗膜后,利用Millpore增强型ECL化学发光液显影,拍照后利用Photoshop CS3软件分析目的蛋白的表达水平,β-actin作为蛋白上样内参照.5.实时荧光定量PCR检测平滑肌细胞收缩表型蛋白Marker的mRNA水平

HA*Cs经牵张力刺激后,提取细胞总RNA,使用T*ARA逆转录试剂盒将RNA样本逆转录为cDNA,然后使用T*ARA SYBR Green PCR试剂盒进行实时荧光定量PCR反应,所用的目的基因引物由上海吉玛生物公司合成.反应体系与反应条件根据试剂盒说明操作,反应结束后得到Ct值,计算2-△△ct,GAPDH作为内参.

6.细胞转染

细胞生长密度至70%-80%时,利用Lipo2000分别转染miRNA inhibitor或mimics,调节miRNAs分子的表达水平,细胞转染后48小时,然后给予牵张力刺激,明确参与介导牵张力调节平滑肌细胞表型转化中的niRNAs.实验所用的miRNA inhibitor或mimics由上海吉玛公司合成.

7.统计学分析

所用数据以均数±,标准误(mean±,SEM)表示,使用SPSS13.0统计学软件进行数据分析,多组之间的比较采用单因素方差分析,两组之间的比较采用t检验,p＜0.05被认为有统计学意义.

结果

1miRNA芯片结果显示,与静止对照组相比,16%牵张力显著改变体外培养的HA*Cs中多个miRNA分子的表达(p＜0.05),包括let-7c、miR-200c、 miR-21、miR-221、miR-145等,其中miR-21、miR-221、miR-145等几个miRNA分子被证实与平滑肌细胞的表型转化有关.

2.实时荧光定量PCR结果显示,与静止对照相比,16%牵张力上调miR-21的表达,抑制miR-145、miR-221的表达,与芯片结果一致(p＜0.05),而对另外一与平滑肌细胞表型调节密切相关的miR-143的表达没有显著影响(p＞0.05).

3Western blot结果显示,与静止对照组相比较,16%牵张力明显下调HA*Cs *-α-actin、*22α以及Calponin的蛋白水平,其中对*-α-actin与Calponin蛋白水平的抑制最显著(p＜0.05).调节平滑肌细胞表型转化的关键转录因子SRF与Myocardin的蛋白水平也显著下降(p＜0.05).

4.转染miR-21inhibitor的HA*Cs,经过12小时的16%牵张力刺激后,与转染阴性对照miRNA inhibitor相比较,*-α-actin、*22α以及Calponin的蛋白水平没有显著变化(p＞0.05),

转染miR-221mimics,对16%牵张力诱导的上述平滑肌细胞收缩表型蛋白分子亦没有显著影响(p＞0.05),在静止条件下,分别转染miR-221inhibitor和mimics, *-α-actin、*22a以及Calponin的蛋白水平也没有显著变化(p＞0.05)；转染miR-145mimics,WB结果显示部分逆转16%牵张力对*-α-actin、*22α、Calponin蛋白水平的抑制(p＜0.05).

5.实时定量PCR结果显示,与静止对照相比,16%牵张力明显下调*-α-actin、*22α以及Calponin的mRNA水平(p＜0.01),miR-145mimics明显抑制16%牵张力对上述分子mRNA表达的下调效应(p＜0.05).

6.16%牵张力对KLF4mRNA的表达水平没有显著影响,但上调KLF4的蛋白表达水平(p＜0.05).转染miR-145mimics,显著抑制16%牵张力诱导的KLF4蛋白表达上调(p＜0.05),几乎完全逆转16%牵张力对Myocardin蛋白水平的抑制(p＜0.01),但对SRF的蛋白水平没有明显影响(p＞0.05).

7.PCR结果证实,16%牵张力抑制miR-145的初级转录本pri-miR143/145的表达(p＜0.05)；促进Akt、p38、ERK1/2信号分子的激活,利用PD98059抑制ERK信号通路的激活,显著减轻16%牵张力对miR-145表达的抑制(p＜0.05),增加受牵张力刺激HA*Cs *-α-actin、*22α以及Calponin的表达水平(p＜0.01).

8.16%牵张力上调血管紧张素转化酶(ACE)的mRNA与蛋白表达水平(p＜0.01),利用siRNA下调ACE的蛋白表达水平,部分逆转16%牵张力对miR-145以及平滑肌细胞收缩表型分子表达的抑制(p＜0.05)；但是转染miR-145mimics,也部分抑制16%牵张力诱导的ACE蛋白水平上调(p＜0.05),但对ACE mRNA表达没有显著影响(p＞0.05).

结论

1.16%牵张力诱导体外培养的人主动脉平滑肌细胞(HA*Cs) miRNAs表达谱发生明显改变,包括：-niR-145, miR-21, miR-221, miR-24等与细胞表型相关的miRNAs分子.

2.16%牵张力通过抑制H

第二篇机械生论文样文：韩中日纤维机械产业发展路径与战略研究

纤维机械产业作为纺织业的重要部门之一,其对人类的生存和人们生活水平的提高有着重要的意义.早在欧洲掀起产业革命时期纤维机械产业就已经诞生,出现了具有代表性的纺织机械和化纤织布机等生产工具,并成为推动产业革命向前发展的原动力之一.纤维机械的发明大大提高了纤维产业的劳动生产力,所以,纤维机械产业已成为主导纤维产业发展的明显标志.

近年来,纤维机械产业的发展成为引导服装新潮流趋向的重要性愈来愈凸现出来(如在意大利、德国、法国和日本等).目前,纤维机械产业最为发达的地区在欧洲地区,并成立了专业性组织——欧洲纤维机械协会(CEMATEX),其所属的会员国每年销售的纤维机械占世界纤维机械市场的70%,特别是在过去的10多年中,这些国家一直在进行纤维机械产业生产结构的调整,并联合起来收集和掌握主要国家每一品种和生产企业的情况,以便研究和制定相应的对策,以维护其自身利益.形成针对性较强的竞争优势.

从韩国的情况看,其国内纤维机械产业的产品出口占据世界第四位,但长期以来,韩国纤维机械具有的技术集约性和政府对纤维产业发展的政策一直是不利于内需市场发展的,仅是游利于出口产品的发展.因此,纤维机械产业也和其他产业一样形成以出口为主导的发展模式,从而导致纤维产业生产规模的零散化(中小型化),与发达国家相比在生产技术上还显得相对落后.

中国的情况是,纤维机械产业发展已初具规模,与纤维产业发达国家保持着良好的合作关系,并成为发达国家的零部件生产基地,从生产技术层面看,中国正在努力进行技术升级,但仍存在技术基础薄弱等问题.

日本在纤维机械产业具有其独特的优势,但同时也存在一些急于解决的问题,如标准化及地区适用性等.

目前,韩中日三国各自均在探索本国纤维机械产业新的发展方向,但三国间在这一领域的合作显得滞后,三国都为确保本国的市场竞争力而丧失了合作的时机.为此,本论文认为,韩中日三国要想建立起长期合作发展关系,首先应理清三国的利害关系,构建合作的理念和信心,即三国间通过纤维机械产业的模式化进行技术转移和共同研制开发,韩国和中国通过日本企业的技术转移建立起长期的技术开发体系,日本国内纤维机械产业应消除中下游生产结构,其部分由韩中两国替代,并向韩中两国出口低价和高质量的生产机械,三国合力共同占领亚洲市场及欧洲等市场,以打破其它区域集团化的影响.

本论文主要由六个部分组成,约12万字.

第一章为绪论部分,主要阐述了选题的背景和研究的意义、必要性、目的与方法,本课题的研究现状,研究的主要内容、创新及不足之处.

韩中日三国的纤维机械产业在各自的制造业中均占有重要的地位,也是三国对外出口的大宗商品之一.本人一直从事与纤维机械生产及进出口有关的工作,对这一领域较为熟悉,故选择了这一课题作为博士生毕业论文的写作,另外,研究韩中日三国的纤维机械的发展路径及其战略,寻找扩大三方在该领域的合作具有重要的意义.在研究方法上采用以产业经济理论为基础对世界纤维机械产业的发展进行了综合性分析,即市场规模及技术开发状况,对韩中日的纤维机械产业采用对比分析方法,勾画出三国机械产业发展基本脉络,发展战略的项是点及主要差异点,通过努力可以进行相互合作具体领域及利益点等.

第二部分为理论部分.重点介绍了产业及产业经济学相关理论,其中包括产业的一般概念及分类方法、产业经济学的含义、产业经济学相关理论,即产业组织理论、产业结构理论、产业关联理论、产业分布理论、产业发展理论,并通过上述理论的分析找出韩中日三国纤维机械产业合作的理论依据及基础条件.尤其是认为从产业结构理论、产业分布理论、产业关联理论等出发,韩中日三国纤维机械产业完全具备合作、共赢的理论基础,即三国纤维机械产业互补性较强,优势互补明显,合作将会为各方带来更大的利益,今后,三国在这一领域的合作*会愈来愈强烈.

第三部分,重点对世界纤维机械产业的发展现状、市场规模、技术研制开发等相关问题进行了分析.20世纪70年代的德国及后来的日本一直在世界纤维市场中占有绝对的优势,成为屈指可数的两大巨头,即第一、第二大纤维机械生产国.世界纤维机械生产大国为了确保其竞争优势的存在,通过各种方式制定了许多有利于其发展的市场准入规则,并不断强化产品出口市场的限制程度,在技术转让方面也愈来愈严格,尤其是对一些高新技术的输出更是实行保护主义政策,以防止其他国家的纤维机械产业发展过快,对其构成威胁,影响其在世界纤维机械市场中主导地位的确立.

第四部分,论述和分析了韩中日纤维机械产业发展的基本路径、现状、主要特点及今后发展趋势等.

韩国纤维机械产业的发展是从60年代末开始起步的,当时韩国把轻纺工业作为制造业的重点发展产业,政府先后出台了一系列大力促进其发展的相关政策,采取政策性的引导,在资金、人员培训、出口等方面给予了各种优惠,纤维机械产业也正是在这种背景下,得到了重视,并取得了快速的发展.因此,韩国的纤维机械产业的发展路径也和其他产业一样,是在政府的大力扶植与支持下不断得以发展壮大的,政府发挥了重要的作用.目前,虽然韩国纤维机械产业作为世界第四位出口国,在世界市场占有一定得份额,但从其国内纤维机械产业生产规模上看却显得较为零散化,生产技术及产品与先进国家相比仍显得落后,为此,今后韩国会进一步提升纤维机械产业的生产结构,加强高新技术含量的纤维机械研发事业,以不断扩大产品出口,提高在国际市场的竞争力.

中国纤维产业在国内经济中占有重要的地位,起步的时间与韩国大体相似,也是60年代初期开始的,起步时间较短发展速度却较快,属于历史悠久的传统型产业.经过多年的发展,现在中国已成为世界最大的纤维机械进口国和继德国、日本之后的第三位出口大国.但目前其纤维机械的核心技术水平及产品等级等与先进国家相比尚有一定的差距,多数纤维机械生产企业依然处于模仿国外大宗产品生产阶段,只有少数产品拥有自己的知识产权.发展的路径是企业的自身作用显得更为突出,依靠国内庞大内需市场的支撑,通过从国外引进资金和技术不断发展壮大.今后,中国纤维机械产业的发展方向是,朝着企业规模化、技术尖端化、产品世界一流化的方向努力,力争打造纤维机械及纤维制品的强国.

日本在纤维及纤维机械生产方面起步要比中国和韩国早些,在50年代后期就已开始,而且发展速度非常快.早在20世纪70年代至80年代初,日本的纤维机械生产就在世界处于领先地位,具有很强的竞争力,并一直在研制开发纤维机械新的核心技术,生产世界一流的纤维及纤维机械制品,长期保持着在国际市场的主导地位.发展的路径是企业自身发展能力强,相关技术的自主研制开发表现突出,企业的市场竞争意识较强烈,新旧技术及新品种更新较快.今后,日本会继续把技术创新,掌握和拥有世界一流技术,加速产品更新作为努力的方向.

第五部分,韩中日纤维机械产业发展战略分析.韩国一直在努力实现外向型的纤维机械产业发展战略,这与其整体对外经济发展政策密切相关,即韩国一直实行以出口为导向的对外经济政策,其中扩大纤维机械出口是其改善贸易收支的重要一环,并通过确保现已掌握的基础技术改进与提升、开发高新技术来强化纤维机械生产品的竞争力,扩大纤维机械制品的出口额.

中国作为世界最大制造业的加工工厂,一直在注意该领域的技术积累,通过企业结构的调整,实现集约化和专业化的生产,进行企业重组,兼并等来扩大企业生产规模,积极进行核心技术的开发及引进,以提升产品的竞争力.

日本正在调整和改善纤维机械产业生产结构,以实现熟练集约型多样化生产战略(Craft Production Strategy),并强化各种先进技术的研制和利用,生产世界一流的产品,以巩固其国际市场上的竞争优势,应对欧洲纤维机械生产企业对亚洲的进入.

第六部分为韩中日纤维机械产业比较与合作.首先对韩中日三国的纤维机械产业发展现状与发展趋势进行了比较分析,认为目前三国的纤维机械生产技术处于三种层次阶段,即日本处于领先地位,韩国处于中间位置,中国处于第三位,但相互各自具有独特的优势,即日本属于掌握和拥有先进技术的先行者型,韩国属于先进技术模仿吸收较快跟随着型,中国属于先进技术自主开发和引进吸收相结合的后起追赶型,今后的发展趋势是,中国的发展潜力较大,逐渐会赶上韩国.其次,对韩中日的纤维机械发展战略进行了比较分析,认为由于三国的国情不同及经济发展政策差异,其纤维机械的发展战略也有很大的差异,韩国是靠政府的主导作用使其纤维机械产业得以快速发展,并成为出口重要商品,中国是企业自身成长能力较强,国内市场庞大,使纤维机械产业不断发展壮大,日本是企业自主创新能力强,具备新产品的研制开发能力,有很强的对外竞争意识,第三,提出了韩中日三国纤维机械合作方案,在技术上开展共同攻关研究,促进技术的转让,在资金和人员培养上进行合作,三国携手抵御欧洲强国对亚洲市场的侵入,等等.

最后为结论部分,韩中日三国纤维机械产业的合作问题.三国需要制定中长期合作计划,分阶段加强在该领域的合作,三国通过机械产品的标准化和模式化形成相对统一的生产结构,按模式化进行分工,先对三国生产的产品加以分析,设定模式化中可能进行合作的领域,然后找出模式化之间有相关联系的合作点,如零部件的共用及标准化,韩国、中国为日本企业营造直接投资和技术转让的良好环境,以为三国在纤维机械产业领域的合作构筑平台.

第三篇机械生论文范文模板：振动训练对大鼠骨骼肌运动能力的影响及其机制探讨

【目的】研究不同模式振动训练对大鼠运动能力的影响,探讨振动训练提高运动能力的细胞分子生物学机制.【方法】以42只雄性SD大鼠为实验对象,建立不同振动训练模型,评价各实验组大鼠骨骼肌运动能力变化,测试肌组织细胞水平、肌肉肌酸激酶(CK)、肌细胞机械生长因子(Mechano growth factor, MGF)表达水平.通过肌卫星细胞培养,测试机械刺激对卫星细胞增殖和蛋白含量影响.【结果】中频率长时间振动组(ML)大鼠游泳成绩和最大抓力均显著高于对照组(CC),且该组的腓肠肌相对质量、肌纤维横截面积(CSA)、CK和MGF mRNA的表达均显著增加(P <, 0.05),卫星细胞培养结果显示,机械张力刺激后,卫星细胞增殖能力均大于对照组(p<, 0.01),且15%拉伸刺激增殖效果最佳.【结论】振动训练刺激可能通过激活卫星细胞增殖和肌细胞机械生长因子的表达、促进肌纤维选择性肥大、提高骨骼肌细胞代谢酶CK活性等途径提高肌肉的运动能力.

第四篇机械生论文范例：混合垃圾机械生物预处理燃烧和填埋特性研究

作为发展中国家,中国的城市生活垃圾管理水平较低,基础设施较为落后.多数城市产生的垃圾采取混合收集方式,厨余组分含量相对较高,导致混合垃圾具有含水率高、热值低和有机组分含量大的特点.混合垃圾填埋产生渗滤液和填埋气造成长期环境污染,给有限的土地资源带来沉重压力.混合垃圾热值低、含水率高的特点影响垃圾焚烧的经济性,并导致严重的环境污染.机械生物预处理(MBP)能够通过利用生物降解产生的生物反应热促进水分蒸发,降低含水率并提高热值,是填埋和焚烧的理想预处理技术,因而在一些发达国家得到了推广应用.

本研究对中国典型城市垃圾管理情况进行了系统的调查研究,对原生垃圾及典型组分的理化性质进行了分析,确定MBP处理过程的影响因素和特性,研究了MBP处理对垃圾的燃烧特性和填埋特性的影响,提出了一种适用于中国混合垃圾的基于MBP的处理工艺,并在普兰店市和皮口镇得到了应用.本论文围绕以上内容,主要开展了以下几方面工作：

(1)对大连市中心城区和周边中小城市的垃圾收集、运输、转运、处理和最终处置情况进行了调查研究.调研结果表明：大连市全域的垃圾目前仍采取填埋方式,中小城市普遍采用的垃圾简易填埋和露天堆放的方式对周边环境造成严重污染；对各区域的垃圾进行了取样,分析了容重、组分、含水率、可燃物和不可燃物组分、低位热值(LHV)等理化特性；混合垃圾厨余含量高(>,50%)、高含水率(50.7%-56.9%)和低LHV(3310-4129kJ/kg)的特点表明不适宜直接进行填埋或焚烧处理；对垃圾典型组分(塑料、橡胶、纺织物、纸类、木竹、厨余、植物和灰土)和混合垃圾的工业分析、元素分析、总挥发性固体(TVS)、总有机碳(TOC)、总氮(TKN)和碳氮比(C/N)进行了测定.

(2)采用自制的4套MBP反应器用于MBP反应过程影响因素的研究.结果表明可燃组分(塑料、橡胶、纺织物、木竹和纸类)增加物料孔隙率并降低厨余含水率；MBP过程物料产生渗滤液的COD明显低于原生垃圾直接填埋的渗滤液；MBP反应过程的初期、中期和后期适宜通风量分别为2.7×,10-3,0.081,3.6×,10-3Nm3/min·,m3；混合垃圾的适宜初始粒径为5cm；机械搅拌不仅促进可生物降解组分粒径的减小,同时导致物料温度的显著下降,反应中期为避免生物反应热过多散失应停止机械搅拌；物料高度在反应期间逐渐减少并导致热量散失增加,对物料的及时补充可使物料温度显著升高；对比压缩预处理和堆酵预处理,对混合垃圾MBP处理过程参数变化进行了较为系统的研究.

(3)对混合垃圾和MBP处理后垃圾的燃烧特性进行了研究.MBP处理过程(12d)垃圾物料含水率从61.2%降至11.3%,LHV从4862kJ/kg升至12843kJ/kg,可生物降解组分粒径在0-9d期间迅速减小,粒径小于7mm的组分具有高灰分(54.6%)、低LHV值(5505kJ/kg)的特点而不适宜进行焚烧处理；对垃圾初始物料和MBP处理后的物料进行非等温微量热重分析,应用Coats-Redfern法拟合获得反应动力学参数；通过对表观活化能、含水率、热值、粒径分布、理论空气量、烟气量、理论燃烧温度数据分析,研究了MBP处理对混合垃圾燃烧特性的影响.

(4)对混合垃圾、MBP处理后垃圾和堆肥产品的填埋特性进行了研究.MBP处理后垃圾和堆肥产品的质量相对于混合垃圾大大减小；MBP处理后垃圾和堆肥产品在封闭填埋阶段无渗滤液产生；对降水作用下三种物料填埋产生的渗滤液COD、NH4+-N、 pH、EC和色度等特性进行了测定；与混合垃圾相()(COD:6,276～18,326mg/L, NH4+-N:332～621mg/L),MBP处理后垃圾和堆肥产品的渗滤液COD (1,757～9,874mg/L)和NH4+-N (22～154mg/L)均明显下降.

(5)根据中国混合收集垃圾特性和MBP实验结果,提出了一项基于MBP的混合收集垃圾综合处理技术,并在普兰店市生活垃圾处理厂和皮口生活垃圾减量化及资源化转运中心取得了应用.

第五篇机械生论文范文格式：海气通量的涡相关计算和参数化方法研究

海气界面通量是描述海气相互作用、全球气候变化、大气和海洋环流、飓风的发展、海浪的产生、混合层和季节温跃层等大量动力学过程的重要参量.因此,简单、快速而且准确的计算海气界面通量就变得十分重要.本文的研究内容是基于一个海气界面通量浮标和声学波浪流速剖面仪对海气界面的大气湍流和海浪信息的观测数据,围绕着海气界面通量的涡相关计算和参数化方法这一核心问题,展开了大气边界层湍流分析、非湍流运动对涡相关通量的影响、海浪对动量通量（风应力）的影响及拖曳系数的参数化等方面的研究.

本文首先根据适用于分析非线性和非平稳信号的HHT（Hilbert–Huang Transform）方法,分析海气界面通量浮标观测的大气湍流数据,将其划分为具有不同特征频率的运动模态,它们对应不同时间尺度的湍流运动涡旋.并对各个运动模态进行能谱分析,将各个模态的能量贡献峰值区与湍流能谱中的惯性子区和含能大涡区相对应.

本文然后基于HHT,提出了一种移除非湍流运动对涡相关通量影响的新方法.该方法通过计算各个运动模态对通量的贡献,建立通量对时间尺度的依赖,进而找出区分湍流模态和非湍流模态的间隙模态,通过从原始信号中移除非湍流模态,实现对非湍流影响的去除.通过通量浮标的观测数据,将新方法计算的涡相关通量与另外三种方法（直接平均、滑动平均和多尺度分解法）进行比较,验证了新方法在去除非湍流影响方面的有效性和优越性.

本文还围绕着海浪对动量通量的影响及其块体参数化展开了相关的研究.通过处理浮标和潜标观测的海浪数据,获得了一个与涡相关通量时空同步的海浪数据集.基于海浪和通量同步观测的六个数据集,对六种考虑了海浪影响的参数化方案（粗糙长度或拖曳系数）进行评估,结果显示在u*<,0.5m/s（大约对应U_(10)<,12m/s）时,六种方案的计算值与观测值十分接近,而在u*≥0.5m/s（大约对应U_(10)≥12m/s）时,各个方案与观测值之间普遍存在显著的偏差.

为了改善这个偏差,本文通过构造简单的二维简谐波模型及粗略的推导,研究表面波引起的海面起伏对动量通量的影响,认为波陡是与此影响相关的主要参数.然后,基于相似理论、考虑海浪的Charnock关系和Toba的3/2幂律关系,得到了一个新的拖曳系数参数化形式（风速适用范围0<,U_(10)<,20m/s）,其中包含的参数为波陡和风海雷诺数.用观测数据对新参数化的有效性进行检验,结果显示新方案显著改善了风速大于12m/s时的偏差.与另外六种方案的比较结果显示,新参数化与观测值之间的相对误差是最小的.但是,由于本文数据的风速限制,新参数化尚未考虑拖曳系数在高风速下随风速增加而趋缓或降低的现象.

这篇机械生论文范文为免费优秀学术论文范文,可用于相关写作参考.

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