简介:本文是代谢组学和脾胃虚弱相关毕业论文范文跟代谢组学相关在职研究生论文范文.
[摘 要] 目的 采用代謝组学探究脾虚湿盛证肝癌患者发病机制及健脾化湿法干预的分子生物学效应. 方法 选取2017年6月～2019年6月新疆医科大学附属中医医院（以下简称“我院”）体检中心体检的50名平和质者作为空白组,选取我院收治的50例脾虚湿盛证肝癌患者作为对照组,50例服用四君子汤干预1个月的肝癌患者作为观察组.采用超高效液相色谱-高清质谱联用技术对三组入选者血浆样本进行代谢组学分析. 结果 在入选对象血液样品鉴定出谷胱甘肽、左旋谷氨酸等19个潜在生物标志物.与空白组比较,对照组中有6个表现为上升趋势,13个表现为下降趋势（P < 0.05或P < 0.01）.经四君子汤干预后,其中17个具有回调作用,调整差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）;根据这17个回调生物标志物找到D-谷氨酰胺和谷氨酸代谢、牛磺酸和牛磺酸代谢等6条相关代谢通路. 结论 脾虚湿盛证肝癌患者体内存在氨基酸代谢、花生四稀酸代谢、脂肪酸代谢、谷胱甘肽代谢等紊乱,四君子汤可能通过调节以上相关代谢通路对脾虚湿盛证肝癌患者具有调节作用.
[关键词] 肝癌;脾虚湿盛证;超高效液相色谱-高清质谱;血浆代谢组学
[中图分类号] R246.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2020）04（c）-0145-04
Study on plaa metabolomics of liver cancer patients with syndrome of dampness excessiveness due to spleen deficiency based on UPLC-HDMS
WANG DongLI JingjieLYU Shuqin
VIP Ward, Chinese Medicine Hospital of Xinjiang Medical University, Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumqi830000, China
[Abstract] Objective To study the pathogenesis of liver cancer with syndrome of dampness excessiveness due to spleen deficiency by metabonomics and the molecular biological effect of the intervention of invigorating spleen for eliminating dampness. Methods Fifty persons with peace quality of blank group were selected from the physical examination center of Chinese Medicine Hospital of Xinjiang Medical University （hereinafter referred to as “our hospital”） from June 2017 to June 2019. 50 cases of liver cancer patients with spleen deficiency and dampness syndrome in our hospital were taken as control group and 50 cases of liver cancer patients taking Sijunzi Decoction for one month were taken as observation group. Metabonomics analysis of plaa samples from three groups of participants was carried out by using the technology of ultra-high performance liquid chromatography-high definition mass spectrometry. Results Nineteen potential biomarkers such as glutathione and L-glutamic acid were identified in the blood samples of the selected subjects. Compared with blank group, 6 of control group showed an upward trend and 13 showed a downward trend （P < 0.05 or P < 0.01）. After intervention of Sijunzi Decoction, 17 of them had callback effect, and the adjustment difference was statistically significant （P < 0.05 or P < 0.01）. According to these 17 callback biomarkers, 6 related metabolic pathways including D-glutamine and glutamate metaboli, taurine and taurine metaboli were found. Conclusion There are disorders of amino acid metaboli, arachidonic acid metaboli, fatty acid metaboli and glutathione metaboli in liver cancer of syndrome of dampness excessiveness due to spleen deficiency. Sijunzi Decoction may regulate the disorders by above metabolic pathways in liver cancer of syndrome of dampness excessiveness due to spleen deficiency.
[Key words] Liver cancer; Syndrome of dampness excessiveness due to spleen deficiency; Ultra-high performance liquid chromatography-high definition mass spectrometry; Plaa metabolomics
中医体系是一个复合体系,其整体观及辨证论治是中医药治疗思路的两大特色,而中药方剂成分复杂,作用靶点众多,使传统的分析方法难以系统评价这种复杂的作用机制.代谢组学可以定性和定量分析生理病理刺激或遗传变异诱导等产生的小分子生物代谢应答产物,再通过整合高通量信息提取技术和多元变量分析技术,以寻找相关的代谢产物及相应的代谢途径[1].代谢组学符合中医药多靶点、多层次作用的特点,对揭示中医药治疗的生物学基础及中医药的现代科学研究起到有力推动作用,是中医药现代化发展的重要研究方法[2].本研究使用超高效液相色谱-高清质谱（UPLC-HDMS）联用技术观察脾虚湿盛证肝癌患者的血浆代谢学差异及健脾化湿法对其的干预作用,以探究其分子生物学效应,为肝癌脾虚湿盛证的早期诊断、预后评估、药物干预治疗等方面提供一定依据.
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2017年6月～2019年6月于新疆医科大学附属中医医院（以下简称“我院”）体检中心体验的50名平和质健康体检者作为空白组,于我院住院的50例脾虚湿盛证肝癌患者作为对照组,50例给予以四君子汤为主方干预1个月后的脾虚湿盛证肝癌患者作为观察组.本研究经我院医学委员会批准.
1.2 诊断标准
原发性肝癌符合《原发性肝癌的临床诊断与分期标准》[3],所有患者均经组织学检查证实为原发性肝癌.中医脾虚湿盛证诊断参照《中医病证诊断疗效标准》[4]及《中医证候辨治轨范（修订版）》[5],症状：①大便溏泄;②食欲减退;③食后或下午腹胀、喜按;④面色萎黄;⑤肌瘦无力.五项中具备三项以上便可确诊为脾虚湿盛证.
1.3 纳入标准
①符合以上原发性肝癌西医诊断标准及中医脾虚湿盛证证候诊断标准,且以原发性肝癌为第一诊断;②年龄18岁以上;③所有纳入对象均自愿参加研究,并签署知情同意书.
1.4 排除标准
①合并有活动性结核或严重感染性疾病;②有精神障碍或严重心脑血管疾病;③妊娠期或哺乳期妇女.
1.5 检测方法
1.5.1 血液样品采集与处理 抽取入选者清晨空腹静脉血10 mL,于漩涡混合器（其林贝尔仪器制造有限公司,中国）内进行涡旋15 min,于KDC-160HR高速冷冻离心机（科大创新股份有限公司,中国）离心15 min（4℃,轉速14 000 r/min,离心半径7 cm）,取上清液400 μL进行真空干燥,再用100 μL的80%甲醇复溶,再离心15 min（4℃,转速14 000 r/min,离心半径7 cm）,取上清液200 μL进行UPLC-HDMS分析.
1.5.2 UPLC-HDMS检测 UPLC：采用UPLC液相色谱仪（Waters集团公司生产,美国）,样品检测使用Acqiuty UPLCTMBEHC18色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7 μm）及UPLC C18保护柱（2.1 mm×5.0 mm）,流速0.4 mL/min,柱温40℃,样品仓温4℃.正离子（ESI+）模式：流动相A为蒸馏水+0.1%甲酸（北京迪马科技欧泰科技发展中心,中国）,B为乙腈（赛默飞世尔公司,美国）+0.1%甲酸;负离子（ESI-）模式：流动相A为蒸馏水,B为乙腈.血浆样品梯度洗脱程序按操作说明书进行.质谱条件：样品经UPLC分离后用Waters LCT Premier XE TOF质谱仪（Waters集团公司,美国）进行分析.离子源：加热型电喷雾,采用电喷雾正离子（ESI+）和负离子（ESI-）扫描模式进行检测,离子源温度110℃,ESI+和ESI-模式喷雾电压分别为1.3、1.5 kV,脱溶剂气体流速750 L/h;锥孔气体流速20 L/h;传输毛细管温度350℃.全扫描方式,扫描质量范围为100～1500 m/z.
1.6 统计学方法
采用UPLC-HDMS技术进行血液代谢轮廓分析,结合Progenesis QI2.1软件（Waters集团公司,美国）进行色谱峰识别和峰值匹配,同时使用MassLynx V4.1软件在HMDB及KEGG等检索数据库里进行数据降维及质谱矩阵信息获取,以寻找潜在标志物.数据统计采用SPSS 20.0统计软件,计量资料用均数±标准差（x±s）表示,组间比较采用两独立样本t检验,计数资料采用χ2检验.以P < 0.05为差异有统计学意义.
2 结果
2.1 血清中潜在生物标志物信息分析
在入选对象血液样品中,共鉴定出19个潜在生物标志物.与空白组比较,对照组中有6个生物标志物表现为上升趋势,13个表现为下降趋势（P < 0.05或P < 0.01）.比较对照组及观察组,四君子汤对其中17个具有回调作用,调整差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）.见表1.
2.2 生物标志物相关代谢通路
将检测具有调整作用的17个血液样品中的生物标志物进行MetPA识别显著代谢物富集通路分析.共找到6条相关代谢通路.见表2.
3 讨论
肝癌作为目前死亡率居世界第三位的常见恶性肿瘤,笔者在临床上对大量肝癌患者的诊治中,发现很多肝癌患者表现为脾虚湿盛型,运用以四君子汤为主方进行健脾利湿治疗,往往取得良好的疗效.四君子汤是出自于宋代《太平惠民和剂局方》,是古今治疗脾胃气虚证的经典方剂[6].本方由人参、茯苓、白术、炙甘草组成,其中君药人参性甘温,可以补中益气,配合能健脾燥湿的白术,帮助脾胃运化去湿;同时佐以茯苓健脾渗湿,合炙甘草养阴益气,调和诸药,四味共奏补中益气、健脾化湿之功.药理发现四君子汤可调节患者的胃肠功能,增强机体免疫力,还能抗衰老,抗肿瘤等.李杏英等[7]使用黄芪四君子汤治疗老年原发性肝癌放疗患者,发现其可提高患者的免疫功能,且对放射具有明显增敏效果.赵华[8]使用四君子汤治疗晚期肝癌患者,发现其可降低患者胃肠道反应及白细胞低、发热、贫血的发生率.吴正平等[9]发现四君子汤可提高大鼠的T、B淋巴细胞增殖能力,表明四君子汤可改善免疫系统功能.
本研究使用UPLC-HDMS方法共鉴定出19个潜在生物标志物,包括谷胱甘肽、左旋谷氨酸等.与健康者比较,脾虚湿盛证肝癌患者中有6个生物标志物表现为上升趋势,13个表现为下降,表明脾虚湿盛证肝癌患者存在相关代谢紊乱.其中谷胱甘肽具有抗氧化和整合解毒作用,能保护受毒害的肝实质细胞,在机体生命活动中至关重要[10].左旋谷氨酸经酶催化后,与血中过多的氨结合成无害的谷氨酰胺,防止氨中毒[11].鸟氨酸参与肿瘤的生长、侵袭及转移,有研究表明鸟氨酸的含量与腫瘤恶性程度分级呈负相关[12].脯氨酸作为细胞膜及活性酶的保护物质,能够抑制异常细胞增殖并诱导癌细胞凋亡[13].酪氨酸是身体的天然止痛药,具有抗刺激和抗抑郁的作用,而酪氨酸在癌症患者中含量明显降低[14].本研究发现鸟氨酸、脯氨酸等氨基酸在肝癌患者血浆内的生物合成明显降低,估计与肿瘤微环境的改变密切相关.另外,牛磺酸、牛磺熊去氧胆酸等胆汁酸在脂肪代谢中起着重要作用,可促进肠道及肝脏中脂肪和胆固醇的运输与排泄,是吸收膳食脂肪和维生素的基础[15].花生四烯酸可酯化胆固醇,增加血管弹性,降低血液黏度,对预防心血管疾病、糖尿病和肿瘤等具有重要功效[16].泛酸是辅酶A的组成部分,而辅酶A主要参与蛋白质、脂肪、糖代谢有关的三羧酸循环,故泛酸及辅酶A是机体代谢必不可缺少的物质[17-19].丙二酸在辅酶作用下转化为琥珀酸,丙二酸排泄障碍会使琥珀酸脱氢酶活性下降,导致神经及多脏器受损[20].维生素K2主要作用是维持机体的正常凝血功能,日本大阪市立大学Habu等的一项初步研究显示,维生素K2可预防肝硬化进展为肝癌[21].近几年研究发现,维生素K2可抑制白血病、骨髓增生异常综合征等疾病代谢,具有明显的抗肿瘤作用[22].本研究发现肝癌患者中的牛磺酸、牛磺去氧胆酸等胆汁酸降低,花生四烯酸、泛酸、维生素K2升高,辅酶A、丙二酸降低,由此可见,肝癌患者存在脂类代谢、花生四稀酸代谢、三羧酸循环障碍等紊乱.
经使用四君子汤加减健脾化湿后,本研究发现脾虚湿盛证肝癌患者中17个生物标志物具有回调作用,提示四君子汤对其有效调整,可改善患者相关代谢紊乱.且经过这些代谢物富集通路分析,发现D-谷氨酰胺和谷氨酸代谢等6条代谢通路,提示脾虚湿盛证肝癌的形成、发展与这6条代谢路径紊乱密切相关.通过四君子汤干预后,可经过以上代谢通路使得部分潜在生物标志物回调,从而改善脾虚湿盛证肝癌造成的氨基酸代谢、脂类代谢、花生四稀酸代谢等紊乱,对相关机体功能紊乱起到保护和调节作用,改善脾虚湿盛证肝癌患者的疾病状态.
[参考文献]
[1] 王维嘉,杜鹃,赵春临.基于超高效液相-质谱联用技术的胃癌患者血浆代谢组学研究[J].郑州大学学报：医学版,2018,53（1）：41-46.
[2] 张冠,王恒和.基于代谢组学的中医心系病症证候研究进展[J].江苏中医药,2019,51（8）：86-89.
[3] 中国抗癌协会肝癌专业委员会.原发性肝癌的临床诊断与分期标准[J].中华肝脏病杂志,2001,9（6）：324.
[4] 国家中医药管理局.中医病证诊断疗效标准[M].南京：南京大学出版社,1994：122.
[5] 冷方南.中医证候辨治轨范（修订版）[M].北京：人民军医出版社,2011：138-140.
[6] 余松,朱肖鸿,付淑艳.四君子汤合调营汤加减治疗脾虚湿盛兼血瘀型肝硬化腹水的疗效观察[J].中西医结合肝病杂志,2018,22（4）：240-241.
[7] 李杏英,杨德全,骆常义,等.黄芪四君子汤对老年原发性肝癌放疗患者放射增敏及免疫功能的影响[J].中国老年学杂志,2019,39（16）：3937-3940.
[8] 赵华.四君子汤联合雷替曲塞和奥沙利铂治疗晚期肝癌的疗效及对免疫功能的影响[J].现代中西医结合杂志,2019,28（15）：1630-1633,1644.
[9] 吴正平,周智兴,雷波.四君子汤对衰老模型大鼠免疫功能的影响[J].中国实验方剂学杂志,2010,16（7）：128-129.
[10] 王仲臣,王广征,刘国庆.还原型谷胱甘肽对乙型肝炎患者肝纤维化和免疫功能的影响[J].西北药学杂志,2019, 34（4）：548-551.
[11] 李瀚旻,张六通,梅家俊,等.左旋谷氨酸单钠-肝再生-大鼠模型的建立[J].世界华人消化杂志,2000,8（7）：824-826.
[12] 欧洁,王顺超,孙丽丹,等.鸟氨酸脱羧酶抗酶-1过表达促进非小细胞肺癌细胞系A549凋亡[J].基础医学与临床,2019,39（3）：332-336.
[13] 马勇,张爱巧,王尚任,等.富含脯氨酸的蛋白酪氨酸激酶2蛋白在非肌层浸润性膀胱癌中的表达及意义[J].中华泌尿外科杂志,2019,40（7）：526-530.
[14] 李素贞,徐锋,徐平.高转移肝癌细胞HCCLM6的酪氨酸磷酸化蛋白质组学研究[J].军事医学,2019,43（2）：106-111.
[15] 况俊良,郑晓皎,赵爱华,等.代谢性疾病中胆汁酸水平变化及相关治疗策略[J].上海交通大学学报：医学版,2019,39（6）：678-683.
[16] 穆彬,任永康,张学虎.冠心病患者介入术后血栓素B2与花生四烯酸诱导血小板聚集率的相关性研究[J].中华老年心脑血管病杂志,2019,21（2）：151-154.
[17] 俞殷珏,赵林丰,李荣.中链酰基辅酶A脱氢酶增强乳腺癌细胞的侵袭和转移能力[J].南方医科大学学报,2019,39（6）：650-656.
[18] 杨波,杨强,张爱华,等.基于代谢组学技术的中医药研究进展[J].中国医药导报,2019,16（24）：24-28.
[19] 赵金哲,王娟,沐勇杰,等.肝癌微波消融中热损伤参数分析[J].北京生物医学工程,2019,38（4）：392-399,423.
[20] 陈孝杰,朱志军.器官移植治疗丙二酸血症的研究进展[J].中华器官移植杂志,2018,39（11）：700-702.
[21] 张锋,苗江永.维生素K2调控Wnt/β-catenin信号对肝癌细胞侵袭、凋亡的影响及机制研究[J].胃肠病学和肝病学杂志,2017,26（11）：1222-1225.
[22] 秦传蓉,张志敏,杨波,等.维生素K2诱导肝癌细胞株Hep-G2凋亡机制研究[J].中华肿瘤防治杂志,2017,24（24）：1706-1711.
（收稿日期：2019-11-12 本文编辑：李亚聪）
总结：上文结束语，该文是一篇关于代谢组学方面的相关大学硕士和代谢组学和脾胃虚弱本科毕业论文以及相关代谢组学和脾胃虚弱论文开题报告范文和职称论文写作参考文献资料.
代谢组学引用文献:
[1] 脾胃虚弱和慢性疲劳综合征硕士毕业论文范文 脾胃虚弱和慢性疲劳综合征方面专科毕业论文范文2万字
[2] 肿瘤和代谢组学论文如何写 肿瘤和代谢组学类有关在职研究生论文范文2500字
[3] 代谢组学和微生物毕业论文的格式范文 关于代谢组学和微生物类论文范文文献2000字
