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草果和抗氧化论文范文

《草果醇提物不同极性部位的体外抗氧化活性》

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摘要目的：評价草果醇提物4种不同极性部位的体外抗氧化活性,为该植物中抗氧化活性化学成分的开发研究奠定基础.方法：将草果的干燥果实粉碎后,用95%乙醇加热回流提取,经旋转蒸发浓缩、水浴蒸干后得到醇提取物浸膏;将该浸膏以水分散,再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,分别合并各溶剂萃取液,并收集下层水相,再经旋转蒸发浓缩、水浴蒸干后得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位.采用经典体外抗氧化活性试验,以2,6-二叔丁基-4-苯酚（BHT）作为阳性对照,考察草果醇提物不同极性部位对1,1-二-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基、超氧阴离子自由基的清除能力和对三价铁离子（Fe3+）的还原能力.结果：草果醇提物4种极性部位对DPPH自由基的清除率均达到80%以上,其清除能力强弱排序为乙酸乙酯部位>BHT>正丁醇部位>石油醚部位>水部位;对超氧阴离子自由基的清除率大部分约为30%～40%,其清除能力强弱排序为正丁醇部位>石油醚部位>水部位>乙酸乙酯部位>BHT,但整体弱于其对DPPH自由基的清除能力;对Fe3+也有一定的还原能力,其还原能力强弱排序总体上为正丁醇部位>BHT>乙酸乙酯部位>石油醚部位>水部位,但当水部位质量浓度为4.0 μg/mL时其还原能力升至最强.结论：草果的不同极性部位均具有一定的体外抗氧化能力,但其在不同抗氧化活性试验中的抗氧化活性能力强弱排序并不一致;乙酸乙酯部位对DPPH自由基的清除能力最强,正丁醇部位对超氧阴离子自由基的清除能力和对Fe3+的还原能力最强.

关键词草果;醇提物;极性部位;抗氧化活性;体外

ABSTRACT OBJECTIVE： To evaluate in vitro antioxidant activities of 4 different polar parts of ethanol extract from Amomum tsao-ko, and to lay a foundation for the research and development of antioxidant chemical components in the plant. METHODS： The dried fruits of A. tsao-ko were crushed, then were hearted and reflux extracted with 95% ethanol. The extraction fluid was concentrated by rotary evaporation and evaporated in water bath to obtain the ethanol extract. The extract was dispersed in water,and then extracted with petroleum ether,ethyl acetate and n-butanol organic solvents one by one. Each solvent extract was combined and the lower water phase were collected. Finally, the petroleum ether part, ethyl acetate part, n-butanol part and water part were obtained, after rotary evaporation concentration and water bath evaporation. Through in vitro antioxidant activity tests, using 2,6-di-tert-butyl-4-methylphenol（BHT）as positive control, DPPH radical, superoxide anion radical scenging ability and Fe3+ reducing ability of different polar parts of ethanol extract from A. tsao-ko were investigated. RESULTS： The scenging rates of 4 polar parts of ethanol extract from A. tsao-ko on DPPH radical were all over 80%; the order of scenging ability was ethyl acetate part>BHT>n-butanol part>petroleum ether part>water part. Those of the 4 polar parts to superoxide anion radical were between about 30%-40% mostly; the order of scenging ability was n-butanol part>petroleum ether part>water part>ethyl acetate part>BHT; but those were weaker than their scenging ability to DPPH radical. The polar parts of ethanol extract also had a certain reduction ability to Fe3+; the order of the reduction ability was n-butanol part>BHT>ethyl acetate part>petroleum ether part>water part on the whole, but that of water part rose to the stron- gest when its concentration was 4.0 μg/mL. CONCLUSIONS：The different polar parts of ethanol extract from A. tsao-ko he certain in vitro antioxidant capacity, but the order of antioxidant activity of different polar parts was not the same in different antioxidant activity tests; ethyl acetate part has the strongest scenging effect on DPPH radical, n-butanol part has the strongest scenging ability on superoxide anion radical and reducing ability on Fe3+.

KEYWORDS Amomum tsao-ko; Ethanol extract; Polar parts; Antioxidant activity; in vitro

草果（Amomum tsao-ko Crevost et Lemarie）是姜科豆蔻属多年生草本植物,主要分布于我国云南、广西、贵州等省区[1].草果是药食两用中药材大宗品种之一,主要作为香料应用于食品加工领域,也应用于中药和其他领域,其主要成分有挥发油、醇类、醛类、酮类、蛋白质以及微量元素等[2].干燥成熟的草果果实既是生活中常见的调味香料,也是一种传统中药,具有燥湿健脾、除痰截疟的功能[3].在民间,草果主要用于治疗疟疾、咽喉感染、腹痛、胃功能失调、消化不良、恶心呕吐、腹泻等,还具有降血糖、抗氧化、抗肿瘤等功效[4-6].近年来,随着对草果研究的深入,其药用价值日益受到国内外学者的重视,其提取方法、化学成分和抗氧化活性已经成为了研究热点.

目前,国内外关于草果化学成分的研究主要集中于其挥发油成分[7-9],关于其抗氧化活性研究则多见于草果精油、挥发油以及醇提取物[6,10-12],而草果不同溶剂提取物的抗氧化活性的比较研究报道较少.基于此,本文将以草果干燥果实醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位为研究对象,通过1,1-二-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基、超氧阴离子自由基清除试验,以及三价铁离子（Fe3+）还原试验,考察草果醇提物不同极性部位的体外抗氧化活性,筛选草果中具有抗氧化活性的部位,为该植物抗氧化活性成分的开发研究奠定基础.

1 材料

1.1 仪器

FA1204B型电子天平（上海天美天平仪器有限公司）;SHB-B88型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）;RE-3000A型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）;DZF-6020型真空干燥箱（广州市星烁仪器有限公司）;HH-Z4型数显恒温水浴锅（金坛市城东光芒仪器厂）;L-530型多管架自动平衡离心机（湖南湘仪离心机仪器有限公司）;N4S型紫外-可见分光光度计（上海仪电分析仪器有限公司）.

1.2 药品与试剂

草果药材购自广西玉林市,经右江民族医学院民族医教研室覃道光副教授鉴定为姜科豆蔻属多年生草本植物草果（A. tsao-ko Crevost et Lemarie）的干燥果实.将其粉碎成粗粉,于通风干燥条件下贮存,备用.

2,6-二叔丁基-4-苯酚（BHT,上海晶纯试剂有限公司,优级纯）;DPPH（上海金穗生物科技有限公司）;FeCl3·6H2O（上海实意化学试剂有限公司）;邻苯三酚（津市福晨化学试剂厂）;95%乙醇、无水乙醇、石油醚（60～90 ℃）、乙酸乙酯、正丁醇、浓盐酸、三羟氨基甲烷（Tris）等其他试剂均购自成都市科隆化学品有限公司;水为蒸馏水.

2 方法

2.1 草果醇提物不同极性部位的提取

参照文献方法[13],称取草果粗粉5 kg,加入3倍量95%乙醇（L/kg）加热回流提取,重复提取3次,每次2 h;过滤,合并滤液,在约50 ℃下旋转蒸发浓缩,再水浴蒸干至无醇味后,得醇取物浸膏623.2 g（得率为12.46%）.取该醇提物浸膏适量,加入1倍量水（mL/g）分散制成混悬液,再依次加入石油醚、乙酸乙酯、正丁醇（每次均按体积比1 ∶ 1加入溶剂,多次萃取至上层有机层接近澄清无色后继续加入下一种溶剂提取）进行萃取.分别合并不同上层有机溶剂萃取液,并收集下层水相,在约50 ℃下旋转蒸发浓缩,再水浴蒸干,分别得到石油醚部位浸膏23.05 g（得率为3.69%）、乙酸乙酯部位浸膏18.83 g（得率为3.02%）、正丁醇部位浸膏12.34 g（得率为1.98%）、水部位浸膏39.94 g（得率为6.41%）.

2.2 草果醇提物不同极性部位的抗氧化活性测定

2.2.1 工作溶液的配制分别称取“2.1”项下制备的4种不同极性部位浸膏以及BHT（阳性对照）各0.05 g,用甲醇溶解并定容至50 mL,制得石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位以及BHT质量浓度均为1 g/L的母液;取上述母液各适量,加甲醇分别稀释成质量浓度均为0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 μg/mL的系列工作溶液,于4 ℃低温保存,备用.

2.2.2 不同极性部位对DPPH自由基的清除能力测定参照文献方法[13]并作部分调整后,取“2.2.1”项下4种极性部位以及BHT工作溶液分别进行DPPH自由基的清除试验.每种极性部位样品及BHT均设置11个具塞比色管,编为0～10号：在0号比色管中加入0.1 mmol/L DPPH工作溶液2 mL和无水乙醇2 mL,作为空白管;在1～5号比色管中分别加入0.1 mmol/L DPPH工作溶液2 mL和相应药物的系列工作液（0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 μg/mL）各2 mL,作为试验管;在6～10号管中分别加入无水乙醇2 mL和相应药物的系列工作液（0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 μg/mL）各2 mL,作为对照管.各比色管混匀后,在30 ℃下避光反应30 min.以无水乙醇进行调零,采用紫外-可见分光光度计在517 nm波长处测定各反应溶液的吸光度（A）值,按公式计算DPPH自由基清除率：DPPH自由基清除率（%）等于[1-（A试验-A对照）]/A空白×100%.每种样品均重复测定3次.

2.2.3 不同极性部位对超氧阴离子自由基的清除能力测定参照邻苯三酚自氧化方法[14]并作部分调整后,取“2.2.1”项下4种极性部位以及BHT工作溶液分別进行超氧阴离子自由基清除试验.每种极性部位样品及BHT均设置11个具塞比色管,编为0～10号：0号比色管加入1 mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）4 mL、2.5 mmol/L邻苯三酚溶液0.4 mL和无水乙醇1 mL,作为空白管;1～5号比色管加入1 mol/L Tris-HCl缓冲液4 mL、2.5 mmol/L邻苯三酚溶液0.4 mL和相应药物的系列工作液（0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 μg/mL）各1 mL,作为试验管;6～10号比色管加入1 mol/L Tris-HCl缓冲液4 mL、水0.4 mL和相应药物的系列工作液（0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 μg/mL）各1 mL,作为对照管.各比色管混匀后,在室温下反应 5 min,然后滴加8 mmol/L HCl溶液1 mL终止反应.以水进行调零,采用紫外-可见分光光度计在320 nm波长处测定各反应溶液的A值,按公式计算超氧阴离子清除率：超氧阴离子清除率（%）等于[1-（A试验-A对照）/A空白]×100%.每种样品均重复测定3次.

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草果和抗氧化引用文献: