《基于DPPH清除法测定红蓝草多糖的抗氧化能力》
本文是多糖和抗氧化类硕士学位论文范文与抗氧化有关硕士论文范文.
摘 要：以红蓝草为原料,提取多糖并对其抗氧化性进行研究.采用酶提法联合溶剂提取法,提取红蓝草粗多糖,经Sevage法脱蛋白后,测定红蓝草多糖的含量,并研究其对有机自由基DPPH的清除效果.结果显示,红蓝草多糖对有机自由基DPPH的IC50为121.50mg/L.
关键词：红蓝草;多糖;DPPH清除法;抗氧化性
1引 言
多糖是由多个单糖通过特定的化学键连接而成的,具有广泛生物活性的天然大分子化合物.多糖广泛存在于植物、动物和微生物体内,具有降血糖、抗氧化、提高免疫力等多种生物活性[1].红蓝草（Peristrophe baphica（Spreng）Bremek）又称红丝线、山蓝,具有清肺止咳,凉血止血的功效[2].目前对红蓝草的挥发油、黄酮类、萜类等成分的研究较多[3-5],而多糖的研究鲜见报道.本实验采用DPPH清除法,对红蓝草多糖的抗氧化性能进行研究,为综合开发红蓝草资源提供实验数据参考.
2 实验材料与方
2.1 实验材料
2.1.1供试材料 红蓝草（购买于广西百色市菜市场）,烘干、粉碎并过80目.
2.1.2主要仪器与试剂
UV-2700紫外可见分光光度计（日本岛津公司）,BS110S电子分析天平（北京赛多利斯电子天平有限公司）.邻苯三酚、邻二氮菲、氯仿、正丁醇等均为国产分析纯.
2.2 实验方法
2.2.1 红蓝草多糖的提取和纯化
使用酶提法与溶剂提取法相结合提取红蓝草多糖.参考文献做法[6].在脱色多糖粗品溶液中依次加入一定体积的氯仿和正丁醇,震荡混匀,离心分离,经分液漏斗分离,重复操作3～4次,得到除去蛋白质的多糖溶液.将其浓缩、烘干后得到多糖样品.
2.2.2 葡萄糖标准曲线标定红蓝草多糖的质量浓度
配制系列葡萄糖标准液,并测定490 nm 处吸光度 A 值,得出葡萄糖标准曲线图.根据此标准曲线算出多糖的含量及提取率.样品含量的计算公式如下：
曲线回归方程计算浓度（C）等于（A490+0.0264）/0.0132
多糖提取率等于（C×v/2）/W×1 000
2.2.3红蓝草多糖对有机自由基DPPH的清除测定步骤
首先在10 mL 比色管中分别加入4.0 m L 257.7 mg/L DPPH 溶液和1.0 mL 95 %乙醇,混匀,参比对象为95 %乙醇液,测出517 nm处A0的吸光值.分别将不同体积的待测样液与体积为4.0 m L,浓度为257.7 mg/L的 DPPH 溶液的溶剂（95 %的乙醇溶液）按顺序倒到量程为10 mL的比色管中,混匀,参比对象为95 %乙醇液,测出517 nm处Ar的吸光值.最后在10 mL 比色管中依次加入4.0 m L 257.7 mg/L DPPH 溶液和不同体积红蓝草多糖样品,待反应结束,参比对象为95 %乙醇液,测出517 nm处As的吸光值.计算自由基清除率（Y）.
3结果与分析
3.1葡萄糖标准曲线标定红蓝草多糖的质量浓度
选取490nm为测定波长.在此波长下,得到不同浓度所对应的吸光度值,然后绘制得到A与c的线性关系图,见图1.经过计算得：A等于0.013 2 C+0.0264,相关系数 R2等于0.999 5,表明在选定的浓度内,葡萄糖的吸光度与浓度显现出良好的线性关系.相同实验条件下,测定红蓝草多糖的吸光值,用该曲线计算样品中红蓝草多糖的浓度.
3.2红蓝草多糖对有机自由基DPPH的清除实验结果
依照2.2.3的实验步骤和公式,计算获得Y%与参加反应试样液的浓度c,然后绘制得到它们的线性关系图（如图2）.通过计算得到：Y等于0.4183c-0.8221,R2等于0.9996.由此可以看出Y与c呈良好的线性关系.当清除率 Y 取 50% 则其所对应的 c 值就是 IC50,待测液对有机自由基DPPH清除水平的高低与IC50值成反比.
4 结论
考察红蓝草多糖提取物对DPPH自由基的清除效率,IC50 值为121.50mg/L.实验结果表明,红蓝草多糖具有一定的抗氧化性.红蓝草具有一定的综合开发利用价值,具有开发成功能保健食品、饮料的前景.
参考文献
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作者简介：谢宇奇（1979-）,男,广西靖西人,硕士,高级实验师,研究方向：天然有机化学和光谱分析.
基金项目：广西高校中青年教师基础能力提升项目（KY2016YB419）
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